萊卡公司超分辨顯微鏡采用的超分辨技術介紹

2000 年，德國科學家 StefanHell 開發了另一種超高分辨率顯微技術，其基本原理是通過物理過程來減少激發光的光斑大小，從而直接減少點擴散函數的半高寬來提高分辨率。當特定的熒光分子被比激發波長長的激光照射時，可以被強行猝滅回到基準態。利用這個特性，Hell 等開發出了受激發射損耗顯微技術 (stimulated emission depletion，STED)。其基本的實現過程如圖 2 所示，就是用一束激發光使熒光物質(既可以是化學合成的染料也可以是熒光蛋白)發光的同時，用另外的高能量脈衝激光器發射一束緊挨著的、環型的、波長較長的激光將**束光斑中大部分的熒光物質通過受激發射損耗過程猝滅，從而減少熒光光點的衍射麵積，顯著地提高了顯微鏡的分辨率，原理見下圖。、

STED 成像技術的*大優點是可以快速地觀察活細胞內實時變化的過程，因此在生命科學中應用更加廣泛。

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