顯微鏡玻片製作方法有以下三種:
1.塗片法
塗片法是將材料均勻地塗布在載玻片上的一種製片方法。
塗片材料有單細胞生物、小型藻類、血液、細菌培養液、動植物的疏鬆組織、精巢、花藥等。
塗片時應注意:
(1)載玻片必須清潔。
(2)載玻片要持平。
(3)塗層須均勻。塗抹液滴在載玻片中間偏右,用解剖刀刃或牙簽等塗勻。
(4)塗層要薄。用另一載玻片作推片,沿滴有塗抹液的載玻片麵(二載玻片夾角應為30°~45°)由右向左輕輕推動,塗成均勻一薄層。
(5)固定。如需固定可用化學固定劑或幹燥法(細菌)固定。
(6)染色。細菌用亞甲基藍,血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部塗麵。
(7)衝洗。用吸水紙吸幹或烤幹。
(8)封片。長期保存用加拿大的樹膠片。
2.壓片法
壓片法是將生物材料置於載玻片和蓋片之間,施加一定壓力,將組織細胞壓散的一種製片方法。
壓片法的一般過程:
(1)取材。觀察細胞分裂,應選取細胞分裂旺盛、新鮮的組織細胞為材料。如根尖、莖尖分生組織、骨髓細胞、花藥(花粉母細胞)。精巢(精母細胞)等。
(2)固定。材料固定可根據需要而定,取材後立即壓片觀察,可不作單獨固定處理(與染色同步進行);取材後不立即視察,可將材料用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定。固定2~24小時(因材料而異)後用95%乙醇清洗,保存於70%乙醇中,備用。
(3)離析。對細胞不易散開材料用水解分離液(如1N HCl或鹽酸一酒精液)處理,一般處理6~20min,解離後經水漂洗後方能染色。
(4)染色。染色劑種類很多。觀察染色體常用醋酸洋紅染色液染色。
(5)壓片。將材料放在載玻片上,加一滴清水或染液,蓋上蓋玻片用拇指輕輕壓片。
(6)觀察。壓片後,即可在顯微鏡下觀察。
3.裝片法
裝片法是將生物材料采取整體封固製成玻片標本的方法,用此法可製成臨時或**裝片。
裝片材料有:微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、水螅,植物的葉表皮;昆蟲的翅、足、口器,人的口腔上皮細胞等。
裝片法製作時應注意:
(1)手持載玻片時,應注意持平,或放在平台上。滴水時水量要適當,以恰好被蓋玻片蓋滿為度。(2)應將材料用解剖針或鑷子展開不使重疊,展平在同一平麵上。
(3)放蓋玻片時,從一側慢慢蓋在水滴上,防止出現氣泡。
(4)染色時,將一滴染色液滴在蓋玻片的一側 ,用吸水紙從另一側吸引,使蓋玻片下的標本均勻著色。著色後,用同樣的方法,滴一滴清水,把染色液吸出後,在顯微鏡下觀察。